灵芝三萜类物质抗高血压实验研究

• 灵芝在我国已有两千多年的药用历史。它具有增强机体免 疫力、抗肿瘤、抗衰老、治疗和预防心血管疾病等多种功效。灵芝 中最主要的活性成分是灵芝多糖和灵芝三萜。 灵芝多糖的增强 机体免疫力等功效已通过大量的研究报道而得到公认。灵芝三 萜(triterpenes)是近年来从灵芝中分离得到的另一类具有广泛药 理活性的物质, 是当今灵芝研究的又一热点。研究表明灵芝三萜 具有保肝护肝、抗肿瘤、抗 H IV1及 H IV1蛋白酶活性、抑制胆固 醇合成、镇痛、降血脂等多种药理作用  。此外, M origiw a等还 报道从红芝的 70%乙醇提取物中分离出的 8种灵芝三萜具有体 外抑制猪肾 血管紧张素 转化酶 (agiotensin converting enzym e , ACE)活性的作用。 ACE的高活性是高血压病发病的重要因素, 因此推断灵芝三萜可能具有体内降低血压功效,但至今未见灵芝 三萜降血压效果动物实验研究报道。本文针对这一问题,研究了 灵芝三萜类物质的体内降压作用,并比较了灵芝菌丝体和子实体 的降压效果。 

  1　器材 

  1 . 1　药品 

  1 . 1 . 1　灵芝子实体 由赤芝 Ganoderma lucidum As . 565栽培,为 成熟期子实体, 菌种由中科院广州微生物研究所提供。

   1 . 1 . 2　灵芝菌丝体 由赤芝菌种 A s . 565按文献介绍的方法 (无 锡轻工大学, 王林, 2004硕士论文《灵芝酸发酵及抗慢性支气管 炎活性研究》)经深层液体培养制得, 培养时间 100 h。 

  1 . 1 . 3　灵芝三萜类物质粗样品 称取粉碎、烘干灵芝子实体,按1∶50(m /m)加入无水乙醇, 超声 1 h, 45℃水浴回流浸提 24 h, 0 . 45 μ m 滤膜过滤,滤液 45℃减压浓缩得黑色浸膏,浸膏复溶于 CHC l 3 中, 用饱和 NaHCO3 溶液(体积比为 1∶1)萃取 3次, 取 NaHCO3 溶液层,用 6mol/L盐酸酸化至 pH 3～ 5后用等量 CHC l 3 再萃取 3次, 合并 CHC l 3 层, 减压浓缩得淡黄色粉状固体, 即为灵 芝三萜 (酸性组分)组样品。用分光光度法[ 3]测定粗样中灵芝三 萜物质含量。备用。 1 . 1 . 4　卡托 普利 (Captopril) 汕 头金 石制 药 总厂 生产, 批 号 050106。 1 . 2　动物 原发性高血压大鼠 SHR和正常血压大鼠 WKY, 12周 龄, 体重 250～ 300 g,全部为雄性, 由上海斯莱克实验动物有限责 任公司 〔(许可证号: SGXK(沪)20020010〕提供。标准颗粒饲料 喂养。 1 . 3　仪器 多道生理信号采集处理系统 RM - 6240BD, 四川成都 仪器厂 ;

  2　方法 

  2 . 1　动物筛选 SH R大鼠 50只 , 测量尾动脉血压, 收缩压高 于 180 mmH g用于实验, 低于 180 mmH g的予以剔除; 最终 40 只符合实验要求 。WKY大鼠 30只 , 测量尾动脉血压 , 收缩压 低于 140 mmH g的用于实验, 高于 140 mmH g的予以剔除 ; 最 终 24只符合实验要求。 所有大鼠分笼饲养 , 每笼 2只 , 均自 由饮水进食 , 活动不限 。温度: (25±1)℃, 湿度 : (55±5)%, 光照和黑暗各 12 h。 所有大鼠均于实验前训练 1周后开始正 式实验 。 

  2 . 2 　大鼠血压测量方法 采用尾动脉容积法[ 4] 。测量收缩压 (systolic blood pressure , SBP) , 以 mmH g表示 (1 mmHg≈0 . 133 kPa)。

   2 . 3 　统计分析 数据均以 – x±s表示, 采用组间 t检验, P <0 . 05 3 07 

  LISH IZHEN M EDICINE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2007 VOL . 18 NO. 2 时珍国医国药 2007年第 18卷第 2期

  为具有显著的统计学差异。 

  2 . 4　灵芝三萜降压效果实验 

  2 . 4 . 1　不同剂量灵芝三萜对 SHR血压影响 取 SHR大鼠 24只, 均衡随机分为 5组:①空白对照组;②灵芝三萜大剂量组(900 m g /kg); ③灵芝三萜中剂量组 (450 mg /kg);④灵芝三萜小剂量 组(225m g /kg);⑤卡托普利组 (10 mg /kg)。各组分别测定给药 前收缩压。灵芝三萜组和卡托普利组灌胃给药 1次, 空白对照组 给予等量生理盐水, 分别测定各组给药后 3 h的血压。计算给药 前后血压变化的差值进行统计。结果见表 1。

   2 . 4 . 2　单次给药后 SHR大鼠 24 h血压变化测定 取 SHR大鼠 16只, 均衡随机分为 2组:①空白对照组;②灵芝三萜组(450 m g /kg)。分别灌胃给予生理盐水和灵芝三萜粗样 1次, 测定给 药后 24 h内血压变化情况。 

  2 . 4 . 3　灵芝三萜对 WKY大鼠血压的影响 WKY大鼠 24只,均 衡随机分为 3组:①空白对照组; ②灵芝三萜组 (450m g /kg), ③ 卡托普利组(10m g /kg)。 灵芝三萜组和卡托普利组灌胃给药 1 次, 空白对照组给予等量生理盐水,分别测定各组给药后 24 h内 血压变化情况。 

  2 . 4 . 4　灵芝子实体和菌丝体三萜类物质降压效果比较 分别取 45 g灵芝子实体和菌丝体按 1 . 1方法制备灵芝三萜粗样(灵芝三 萜类物质含量分别为 (0 . 47 g和 0 . 13 g) ,提取物分别全部溶于 5 m l水中 。 SH R大鼠 24只,均衡随机分为 3组:①空白对照组; ② 灵芝子实体三萜组;③灵芝菌丝体三萜组。各组分别测定给药前 收缩压。灵芝三萜各组灌胃给药 1次, 空白对照组给予等量生理 盐水, 测定给药 3h后血压变化。 计算给药前后血压变化的差值 进行统计。

  3　结果 

  3 . 1　不同剂量灵芝三萜对 SHR血压的影响 

  结果表明, 与空白对照组相比, 灵芝三萜小剂量组给药前后 血压变化无显著性差异(P >0 . 05); 灵芝三萜中剂量组可以明显 降低 SHR大鼠血压 (P <0 . 05) , 灵芝三萜大剂量组药后 3 h血压 降低幅度达(25 . 1±13 . 8)mmHg , 呈非常显著变化 (P <0 . 01) , 且用药剂量和效果之间存在着较好的量 -效关系。表明,灵芝三 萜类物质不但具有如文献报道的体外抑制 ACE生物学活性, 而 且具有高效的体内降血压活性。 

  3 . 2　灵芝三萜单次给药后 SHR大鼠 24 h血压变化结果表明, 空白对照组 SHR 24 h血压都处于较平稳状态。 SHR大鼠给药后血压开始下降, 3 h降至最低点 (179 . 2±9 . 3) mmHg , 与空白对照组比较血压降低显著(P <0 . 05), 3 h后血压

  不再继续下降, 从 3 ～ 15 h血压趋于稳定, 从第 15 h血压开始上 升, 直至 21 h时,血压基本恢复给药前水平 。

   3 . 3　灵芝三萜对 WKY大鼠血压的影响 。

  单次给药后 24 h内 WKY收缩压的变化 图 2显示, 空白组 WKY大鼠自身血压在 24 h之内变化范围 在 117～ 121 mmH g之间, 但呈不显著性波动(P >0 . 05)。灵芝三 萜给药组, 给药后 3h血压降至最低点血压(117 . 0±4 . 3)mmH g , 但与空白组比较血压降低无显著性差异(P >0 . 05)。卡托普利 组, 给药后 4h血压降至最低点血压 (113 . 8±7 . 6)mmHg,与空白 组比较也无显著性差异(P >0 . 05)。说明, 灵芝三萜类物质对正 常大鼠的血压无显著的降压作用。 

  3 . 4　灵芝子实体和菌丝体三萜类物质降血压效果比较 相同质 量的灵芝子实体和菌丝体经提取后, 对 SHR 的降血压效果见 。 与空白对照组比较, *P <0 . 05, **P <0 . 01; n =8 结果表明, 相同质量(45 g)灵芝子实体和菌丝体灵芝三萜提 取物喂食 SHR 大鼠, 子实 体提取物具有明显降压效 果 (P < 0 . 05) , 而菌丝体提取物降压效果不明显 , 其原因可能是灵芝菌 丝体经过 100 h的培养, 灵芝三萜类物质含量仍然很低, 而子实 体中具有降压作用的灵芝三萜含量较高, 这与邢增涛等[ 5]对不 同品种灵芝中三萜类化合物的比较研究报道一致。

   4　讨论

   高血压病的发病机理多样,其中肾素 血管紧张素系统(reinin angiotensin system, RAS)中血管紧张素转化酶(ACE)活性异常 增高导致强收缩血管物质 AngII增多引起血压升高是重要机理 之一。临床广泛应用的 ACEI药物通过抑制 ACE的活性而降低 血压。 M origiw a等首次报道了 8个灵芝三萜类化合物在体外 对 ACE酶的作用, 发现 ganoderic acid F对 ACE抑制作用最显著, 其 IC50为 4 . 7×106m ol L1,说明灵芝三萜类物质也是一类 ACE 抑制剂, 通过抑制 ACE活性而降低血压。本研究表明, 灵芝三萜 类物质经口服给药对 SHR大鼠具有显著降压效果, 且灵芝三萜 类物质对正常 WKY大鼠无明显降压作用, 从而进一步表明, 灵 芝三萜类物质不但具有如文献报道的体外抑制 ACE生物学活 性, 而且具有高效的体内降血压活性。 本研究也表明,相同质量(25 g)灵芝子实体和菌丝体, 其灵 芝三萜提取物经喂食 SHR大鼠, 子实体提取物具有明显降压效 果, 而菌丝体提取物降压效果不明显,说明菌丝体中三萜类物质 含量较少。灵芝三萜类化合物可通过从灵芝子实体或发酵菌丝 体中获得, 其中通过深层液体发酵法获取菌丝体再制备灵芝三萜 类物质可以缩短生产周期而成为近几年的研究热点, 但 Sheau Farn Yeh和 Rongsuey Chyr等[ 6,7]的研究表明, 液体发酵培养至 7 d时灵芝菌丝体的三萜类化合物的含量很低,培养至 30 d左右时才达到高峰, 因此,如果希望通过液体发酵来获得以灵芝三萜类 化合物为主的产品, 必须通过菌种的筛选、发酵条件的优化及适 当延长培养时间来实现。